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安譜實(shí)驗(yàn)來守護(hù)您的SPE小柱流速

更新時間:2020-08-10      點(diǎn)擊次數(shù):1857

在SPE小柱的使用過程中有許多老師會疑惑流速問題。在通常的情況下,我們對于正常流速要求是0.5滴到1滴每秒。流速慢,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)周期長,流速快,有可能導(dǎo)致回收率不穩(wěn)定。那么今天我們就來深入討論一下影響SPE流速因素吧。

 

原因一:樣品制備問題

 

大多數(shù)流速問題產(chǎn)生的原因都是樣品制備不充分。比如樣品渾濁,離心過濾不充分導(dǎo)致上樣時候篩板堵塞,或者是樣品本身的蛋白等大分子物質(zhì)未經(jīng)過充分的處理,沒有進(jìn)行有效蛋白沉降,導(dǎo)致篩板堵塞。這類原因造成的流速問題可以通過改善前處理手段來解決。所以說樣品制備充分是保障SPE正常流速的第yi步。

 

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原因二:小柱本身因素(填料粒徑和柱管體積)

 

01

填料粒徑的影響

 

填料粒徑大填裝越松散,對流動相阻力小,流速越快;粒徑越小,填裝越緊致,流速越慢。這種現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱上表現(xiàn)得很明顯。一般小柱填料粒徑的范圍是40-60um,農(nóng)殘級的弗羅里硅土粒徑范圍在75-150um,大孔硅藻土小柱600-900um。所以弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會比一般小柱流速快,尤其是大孔硅藻土小柱,使用時需要加上包裝中配套的導(dǎo)流針來控制流速。

 

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02

柱管體積的影響

 

對于同種填料的產(chǎn)品,當(dāng)填料量一定時,使用的柱管體積越小流速越慢。這是因?yàn)橹荏w積越小,橫截面小,填裝高度越高,所以流動相阻力會增大,導(dǎo)致流速變慢。所以在實(shí)際檢測工作中,如果對上樣量和上樣流速有要求,在不影響固相萃取效果的前提下,可以選擇大體積柱管或者高通量的膜片裝置,CNW的DISK圓盤上樣速度可以達(dá)到50ml/min,在處理大規(guī)模水樣時有明顯的流速優(yōu)勢。

 

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原因三:溶劑的選擇和使用

 

溶劑的選擇是很多老師在實(shí)驗(yàn)過程中容易忽視的點(diǎn),比如:C18小柱,一般用甲醇活化,如果用水活化,由于C18的疏水性,水的浸潤速度會慢于甲醇,導(dǎo)致流速變慢。遇到這種情況,調(diào)整活化溶劑就可以解決問題了。

 

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溶劑使用順序也會影響流速,比如活化溶劑為二氯甲烷,平衡溶劑為水,由于二氯甲烷和水不互溶,所以活化平衡時流速就會很慢。這種情況我們建議在兩種不互溶的溶劑之間加入過渡溶劑甲醇,這樣就可以解決問題了。

 

原因四:空氣層影響

 

空氣層會阻礙液體的流路從而造成流速問題。篩板或者填料松動是形成空氣層的主要原因。商品化的產(chǎn)品經(jīng)過運(yùn)輸?shù)竭_(dá)用戶手中,在運(yùn)輸過程中,填料和篩板間若發(fā)生了位移松動,就容易形成空氣層。這種空氣層有時比較明顯,可以看到填料有斷層或者細(xì)縫。有時這種松動不明顯,只能在小柱使用過程中感受到流速上的差異。這種情況下,輕微的松動問題可以通過壓實(shí)篩板或者施加正負(fù)壓趕走空氣就可以解決了。

 

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除了運(yùn)輸過程可能造成篩板松動,在小柱的SPE洗脫程序中,如果在活化平衡階段不小心讓溶劑走干了,也會使填料中進(jìn)入空氣導(dǎo)致影響流速。這個時候通過加壓或者抽真空排走空氣就可以解決問題了。

總結(jié)下來影響小柱流速的因素主要有以下幾個:樣品制備,填料粒徑和柱管體積,溶劑選擇和使用以及空氣層的影響。當(dāng)然還會有一些別的影響因素, 各位老師在實(shí)驗(yàn)過程中如果有流速方面問題,可以先排查一下這些因素,也可以聯(lián)系我們安譜實(shí)驗(yàn)哦,我們的熱情24小時在線哦~

 

 

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